四種測定蛋白質含量的經典方法比較
來源： http://www.www-bb182.com 類別：實用技術 更新時間：2015-03-30 閱讀次
四種測定蛋白質含量的經典方法比較
三氯醋酸-丙酮沉淀法是最為常用的總蛋白提取方法,具有降低次生代謝物質干擾、減少蛋白降解等優點。該法所提取的蛋白,濃度較高,蛋白質組分完全,各組分的量較均勻,雜質少,離子濃度小,不僅可用于一維電泳( SDS-PAGE)分析,還可用于二維電泳(2-DE)分析。只不過該法成本較高,較為耗時,操作也較為復雜。
PlantTotalProtein ExtractionKit試劑盒,是專門為提取各種植物組織優質全蛋白樣品,以便用于植物生物科學研究而設計的。用該法提取的總蛋白,濃度高,組分完全,各組分均勻,雜質少,離子濃度小,用于SDS-PAGE和2-DE分析效果好。但是,操作復雜,成本高。為了降低成本,對此法進行了改良,主要是將蛋白酶抑制劑混合物改為PMSF;雖然不如試劑盒的效果好,但仍能獲得良好效果。
Bradford法是常用的測定蛋白質濃度的方法,其測定結果基本上準確,而且花費低。不過當提取的蛋白質樣品含有變性劑、還原劑、解離劑和兩性電解質時,這些試劑可與考馬斯亮藍燃料結合,從而影響測定結果,但影響不大。
除了以上三種，凱氏定氮法是最為經典的，也是標準中規定的方法。其中，有凱氏定氮法衍生出來的定氮儀或者也叫做蛋白質測定儀，是測定蛋白質含量的主要儀器。該儀器具有測定速度快，同時測定多個樣品的特點，因此廣受歡迎。而粗蛋白測定儀正因為其自身的優勢，現已成為主流的測定方法。
